이번에는 충남 소재 연구실에 연구용 시약과 소모품 10종을 한꺼번에 납품했습니다. 제조사도 Cytiva, Vector Laboratories, BioLegend, Thermo Fisher(Gibco), SPL로 제각각이고 구매 경로도 달랐지만, 도단이 전부 모아서 한 번에 챙겨 드렸습니다. 대부분은 발주 후 대략 3주 만에 납품을 완료했고, 마지막에 추가로 주문하신 셀 스트레이너는 발주 후 3일 만에 납품했습니다. 이렇게 제조사가 여러 곳이어도 어디서 어떻게 구해야 하는지 알아보고 납품까지 해드리는 것이 도단이 하는 일이고, 대전에서 전국 어느 기관이든 같은 방식으로 납품해 드립니다.
먼저 Cytiva의 [크기=크게]Sepharose™ CL-4B resin/크기 1L 1개입니다. Sepharose CL-4B는 4% 가교(cross-linked) 아가로스 비드로 만든 크기배제 크로마토그래피(size exclusion chromatography, SEC)용 레진입니다. 가교가 되어 있어서 가교되지 않은 아가로스보다 화학적·물리적으로 더 튼튼하고 유기용매에도 잘 견딘다고 소개돼 있습니다. 큰 분자일수록 비드 사이로 먼저 빠져나오고 작은 분자는 비드 안으로 들어갔다 나오는 원리라서, 단백질이나 큰 입자를 크기별로 분리할 때 씁니다. 엑소좀 같은 작은 소포체를 SEC로 분리하는 연구에도 쓰인다는 이야기가 있습니다.
다음은 Vector Laboratories의 클릭 케미스트리·형광 시약 3종입니다. [크기=크게]Azido-dPEG®₁₂-TFP ester/크기는 한쪽 끝에 아지드(azide)기, 반대쪽 끝에 TFP 에스터가 붙은 **PEG 링커(crosslinker)**입니다. TFP 에스터는 단백질의 아민(라이신 등)과 반응해 붙고, 아지드기는 나중에 DBCO나 알킨이 달린 분자와 클릭 반응으로 연결할 수 있어서, 항체나 단백질에 아지드를 도입할 때 쓰는 용도로 이해하시면 됩니다. [크기=크게]AZDye 555 DBCO/크기는 물에 잘 녹는 주황색 형광 염료에 DBCO기가 붙은 시약입니다. Vector 페이지에는 구리 촉매 없이 아지드와 반응하는 copper-free 클릭 반응용으로 소개돼 있고, 여기기/방출 파장이 약 550/565nm라서 Alexa Fluor 555와 구조가 비슷하고 Cy3와는 스펙트럼이 거의 같다고 안내돼 있습니다. 두 시약을 이어서 쓰면 아지드를 붙인 단백질이나 입자를 형광으로 표지하는 흐름이 만들어집니다. 보관은 AZDye 555 DBCO 기준 **-20°C, 건조(desiccate)**로 안내돼 있습니다. 그리고 [크기=크게]VECTASHIELD®/크기 10ml는 면역형광 염색 후 슬라이드를 봉입할 때 쓰는 항소광(antifade) 봉입제로, 굳지 않는 액상(non-hardening) 타입입니다. 바로 쓸 수 있는 상태로 공급되고, 봉입한 슬라이드는 4°C에서 빛을 피해 보관하라고 안내돼 있으며, 커버글라스 가장자리는 매니큐어 등으로 밀봉해도 되고 안 해도 된다고 합니다. 이 세 제품의 메이커인 Vector Laboratories는 면역염색·IHC 시약과 클릭 케미스트리 시약으로 알려진 미국의 회사입니다.
BioLegend 항체는 모두 정제(purified) 항체 4종입니다. [크기=크게]Purified anti-human CD274 (B7-H1, PD-L1) Antibody/크기 25ug는 클론 29E.2A3이고 마우스 IgG2b, κ 항체입니다. BioLegend 페이지에는 유세포분석(flow cytometry)과 파라핀 절편 IHC에 쓸 수 있고 사람 시료에서 확인된 제품으로 안내돼 있으며, 유세포분석은 100µl당 세포 100만 개에 0.5µg 이하, IHC는 5~10µg/ml 정도에서 시작해 직접 적정(titration)하라고 나와 있습니다. 보관은 희석하지 않은 상태로 2~8°C입니다. [크기=크게]Purified anti-human CD9 Antibody/크기 100ug는 엑소좀 표지 단백질로 많이 쓰이는 테트라스파닌 CD9에 대한 항체입니다. 그리고 같이 주문하신 [크기=크게]Purified Mouse IgG1, κ Isotype Ctrl Antibody/크기 50ug와 Purified Mouse IgG2b, κ Isotype Ctrl Antibody(400301) 50ug는 각각 IgG1, IgG2b 형태의 아이소타입 컨트롤입니다. 아이소타입 컨트롤은 항체가 항원과 특이적으로 붙는 것이 아니라 항체의 일부가 비특이적으로 붙어서 나오는 배경 신호를 확인하려고 함께 쓰는 대조군인데, 항체와 같은 아이소타입과 같은 농도로 맞춰 쓰는 것이 일반적입니다. 이번에 PD-L1 항체가 IgG2b라서 IgG2b 컨트롤이 짝이 됩니다. 메이커인 BioLegend는 유세포분석용 항체를 비롯한 면역학 연구용 항체로 널리 알려진 미국의 회사입니다.
[크기=크게]Fetal Bovine Serum, exosome-depleted/크기 50ml 1개는 Thermo Fisher의 Gibco 제품입니다. 일반 FBS에는 소의 엑소좀이 원래 들어 있어서, 세포가 분비하는 엑소좀을 연구할 때는 배지에서 이 소 유래 엑소좀을 미리 제거한 혈청을 씁니다. Thermo Fisher 페이지에는 이 제품이 **US 원산의 Gibco FBS(Value 등급)**로 만든 것이고, 제품 전체에 USP 멸균시험이 진행되며 여기에 마이코플라스마 시험도 포함된다고 안내돼 있습니다. One Shot 포장이라 병째로 얼렸다가 녹여 소분 없이 따라 쓸 수 있는 PET병에 담겨 있는 것이 편리한 점입니다. 다만 같은 페이지에서 엑소좀을 어떤 방식으로 제거했는지, 제거 정도는 얼마나 되는지는 설명하지 않고 있어서, 실험 목적에 따라 필요한 수준인지 따로 확인해 보시는 것이 좋을 것 같습니다. 열 비활성화(56°C, 30분)는 면역학 실험 등에서 권장된다고 하지만, 온도나 시간이 지나치면 혈청이 겔처럼 굳어 못 쓰게 될 수 있다고 하니 유의하셔야 합니다.
마지막으로 SPL의 [크기=크게]100 µm Cell Strainer/크기 1박스입니다. 셀 스트레이너는 세포 현탁액이나 분쇄한 조직을 걸러서 덩어리와 큰 이물질을 제거해 주는 소모품으로, 유세포분석이나 세포 분리 전에 많이 씁니다. 100µm는 비교적 큰 조직 조각을 걸러내는 용도로 쓰이는 규격입니다. SPL은 국내 플라스틱 실험 소모품 제조사입니다.
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